血液-血浆-PBMC

Jimmy

不少测序数据的来源样本，就是血液，所以搞清楚它的一些基本概念很重要。血液/血浆/PBMC
先看看百科里面给的资料：

血液是流动在人的血管和心脏中的一种红色不透明的粘稠液体。

血液由血浆和血细胞组成，一升血浆中含有900—910克的水，65—85克的蛋白质和20克的低分子物质，低分子物质中有多种电解质和有机化合物，血细胞包括红细胞和白细胞和血小板三类细胞。

红细胞平均寿命为120天，白细胞寿命为9—13天，血小板寿命为8—9天。

一般情况下，每人每天都有40ml的血细胞衰老死亡。

同时，也有相应数量的细胞新生。血液的功能包含血细胞功能和血浆功能两部分，有运输、调节人体温度、防御、调节人体渗透压和酸碱平衡四个功能。

下面是我随意找到一个示意图：

再看看血浆是什么：

血浆的主要作用是运载血细胞，运输维持人体生命活动所需的物质和体内产生的废物等。血浆相当于结缔组织的细胞间质。血浆是血液的重要组成部分，呈淡黄色液体（因含有胆红素）。血浆的化学成分中，水分占90~92%，其他10%以溶质血浆蛋白为主，并含有电解质、营养素（nutrients）、酶类（enzymes）、激素类（hormones）、胆固醇（cholesterol）和其他重要组成部分。血浆蛋白是多种蛋白质的总称，用盐析法可将其分为白蛋白、球蛋白和纤维蛋白原三类。

最后再学习一些PBMC:

英文全称：peripheral blood mononuclear cell
外周血单个核细胞，指外周血中具有单个核的细胞。
包含淋巴细胞、单核细胞（monocyte）、树突状细胞和其它少量细胞（造血干细胞等）。

关于它们有一系列的提取分离的实验操作方法。

此情可待bm

一、PBMC的分离
1、取柠檬酸钠、EDTA或肝素抗凝血若干毫升，2000r/min(或500×g)离心5min后，用移液管取出上层血浆，分装冻存备用，然后向血细胞沉淀中加入相同体积（如血液为4ml，离心后取血浆1.5ml，剩余2.5ml，则加入无菌PBS 2.5ml）的Hanks液或无菌PBS（1×，PH7.2），也可用无血清培养基将细胞沉淀混匀。混匀时避免产生气泡。
2、用吸管将淋巴细胞分离液小心地加于离心管底部。尽量避免吸管触碰管壁，分离液柱高不超过离心管的1/4。
3、用吸管将用Hanks液或无菌PBS（1×，PH7.2）混匀的细胞沉淀沿管壁徐徐加于分离液上面，避免血液冲入分离液中（不能使液面破裂，这是关键的一步），而应使之重叠于分离液上。两者柱高之比为1：1，总柱高不超过离心管的2/3处。
4、将盛有分离液和血液的试管置水平离心机中，以2000r/min离心30min。使用软加、减速设置，软加速档3，软减速档设为1。温度设置为23℃
5、离心毕，取第2层（如图，即monocytes and lymphocytes）。尽量少吸取分离液。
6、加5倍以上体积Hanks液或无菌PBS（1×，PH7.2）于PBMC中，用吸管轻轻吹打均匀。避免产生气泡，液柱高度不超过离心管的2/3。以1200r/min(或300×g)离心10min，快速倾出上清液。
7、用Hanks液或无菌PBS（1×，PH7.2）重悬细胞，洗涤2次，每次都以1200r/min(或300×g)离心5min。其中最后一次洗涤时，要定量加入Hanks液或无菌PBS（1×，PH7.2），吹打均匀后取样计数细胞。取0.1ml细胞悬液加0.1ml白细胞稀释液，混匀后吸取1滴，加至计数盘内，使悬液充满计数盘，按白细胞计数法计数4个大方格内的细胞数，以下式计算细胞悬液的细胞密度：
细胞密度=4大格的细胞总数/4×104×稀释倍数（个/ml）
8、检查细胞活力。取2滴细胞悬液加1滴2%台盼蓝染液，混匀。5min后，显微镜下检查。活细胞不着色，死亡细胞呈蓝色。共计数200个单个核细胞，求出活细胞的百分率即细胞的活力。